Tinción de Ziehl Neelsen
La tinción
de Ziehl-Neelsen(BAAR) es una técnica de tinción
diferencialrápida y económica, para la identificación de microorganismos
patógenos, por ejemplo M. tuberculosis .Fue descrita por primera
vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a1926), un bacteriólogo y
Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patólogo.
1.-
Fundamento
Este
método se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos
ybacterias contienen ácido graso|ácidos grasos (por ejemplo, el ácido
micólico)de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que
les confieren la propiedad deresistir la decoloración con alcohol-ácido,
después de la tinción con colorantesbásicos. Por esto se denominan
ácido-alcohol resistencia|bacilos ácido-alcoholresistentes o BAAR. Las
Mycobacterium|micobacterias como
Mycobacteriumtuberculosis|M.
tuberculosis y Mycobacterium marinum|M. marinum y losparásitos coco
(bacteria)|coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades
de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere
calentamiento para que el colorante atraviese la paredbacteriana que contiene
ceras.
2.-
Técnica
Esta
técnica puede realizarse tanto en muestras histológicas como citológicas.
2.1
- Variante histológica
Para
demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Losreactivos
necesarios para su realización son los siguientes:
Ø Ácido periódico 5%
Ø Carbol fucsina de Ziehl
(fucsina fenicada). Preparar mezclando en elorden dado:
a) a)0,5
g fucsina básica
b) b)50
cc agua destilada
c) c)5
cc etanol absoluto
d)
d)2,5 g cristales de fenol derretidos
Ø Hematoxilina
a)
Alcohol
ácido 1%:
b) Alcohol de 70º
·
Ácido
clorhídricoEl procedimiento es el siguiente:
·
Desparafinar
e hidratar los cortes
·
Ácido
periódico 5%, 10 min
·
Lavar
con agua destilada
·
Fucsina
fenicada, 15 min
·
Decolorar
en alcohol ácido al 1%
·
Lavar
con agua destilada
·
Hematoxilina,
10 min
·
Azulidificar
con, por ejemplo, carbonato de litio
·
Deshidratar,
aclarar y montar preparaciones
